EXTRACCIÓN DEL ADN (de higaditos de pollo)

A continuación nos encontramos la práctica de laboratorio para extracción del ADN a partir de trozos de higaditos de pollo.
La práctica la teneis a continuación. Así mismo, os muestro una presentación del proceso, así como un video (al final del texto) sobre extracción casera de ADN por si fuera de vuestro interés.

OBJETIVOS:
El objetivo fundamental de esta práctica es utilizar unas sencillas técnicas para poder extraer el ADN de un tejido animal y por el aspecto que presenta, confirmar su estructura fibrilar. A partir de la longitud enorme de las fibras también se confirma que en el núcleo el ADN se encuentra replegado.

MATERIALES:
Higadito de pollo
Varilla de vidrio
Alcohol de 96:
Cloruro sódico 2M
SDS (nosotros utilizamos detergente)
Arena
Trocito de tela para filtrar
Eosina
Mortero
Vasos de precipitado
Pipeta
Probeta

TÉCNICA:
1. Triturar medio higadito de pollo en un mortero. Añadir una cucharadita arena para que al triturar se puedan romper las membranas y queden los núcleos sueltos.

2. Añadir al triturado, 20 ml de agua. Remover hasta hacer una especie de papilla o puré.

3. Filtrar varias veces en una probeta sobre una tela para separar los restos de tejidos que hayan quedado por romper.
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4. Medir el volumen del filtrado final con una probeta.

5. Añadir al filtrado un volumen igual de cloruro sódico 2M. Con esto conseguimos producir el estallido de los núcleos para que queden libres las fibras de cromatina. Verterlo todo en un vaso de precipitado.

6. A continuación se añade 1 ml de SDS. La acción de este detergente es formar un complejo con las proteínas y separarlas del ADN. Así nos quedará el ADN libre de las proteínas que tiene asociadas.

7. Añadir mediante una pipeta ( o probeta) 25-50 centímetros cúbicos de alcohol de 96:. Hay que hacerlo de forma que el alcohol resbale por las paredes del vaso y se formen dos capas. En la interfase, precipita el ADN. Importante inclinar el vaso de precipitado para evitar el contacto directo y asegurarnos el resbale.

8. Introducir una varilla de vidrio e ir removiendo en la misma dirección. Sobre la varilla se van adhiriendo unas fibras blancas, visibles a simple vista, que son el resultado de la agrupación de muchas fibras de ADN.

9. Tomar una pequeña muestra de las fibras y teñir con eosina, añadiendo una gota del colorante y dejándolo reposar durante 10 minutos. Observar al microscopio. Se pueden conseguir resultados similares utilizando azul de metileno y esperando 1-3 minutos.

CUESTIONES:
1. ¿De qué está formada la cromatina?
2. ¿Para qué añadimos arena al triturado?
3. ¿Por qué crees que estallan los núcleos al añadir el cloruro sódico?
4. ¿Qué acción tiene el SDS sobre la cromatina?
5. Realiza un dibujo de la observación de las fibras al microscopio.

~ por cienciainteractiva en 6 noviembre 2009.